簡(jiǎn)要描述:轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)產(chǎn)品特點(diǎn):1、靈敏度高,抗污染能力強,定量準確,重復性好;2、樣本處理與PCR擴增在同一個(gè)PCR反應管中即可完成;3、無(wú)需加熱產(chǎn)品說(shuō)明:1.高便捷性。 2.靈敏度高。 3.特異性強。 4.精密性好。 5.結果準確可靠。 6.嚴格的質(zhì)量標準。結構及組成:聚合酶鏈式反應液(PCR反應液)、RNA
產(chǎn)品分類(lèi)
Product Category詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | HXG740 |
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規格 | 50T | 供貨周期 | 現貨 |
主要用途 | 科研使用 | 應用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)
通用名稱(chēng):轉基因大豆 MON87705 品系核酸檢測試劑盒 (熒光-PCR 法)
Name :Diagnostic Kit for MON87705 Gene DNA (Real-Time PCR Method)
【包裝規格】50T/盒
本試劑盒適用于檢測轉基因植物的 MON87705 基因,用于篩查待檢測植物中是否含有 MON87705 成分。其檢測結果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用國家標準的 MON87705 特異性引物和探針,用熒光 PCR 技術(shù)進(jìn)行轉基因成分的檢測。
【試劑組成】
名 稱(chēng) | 規 格 |
酶液 | 50μL×1 管 |
MON87705 反應液 | 500μL×2 管 |
MON87705 陽(yáng)性質(zhì)控品 | 50μL ×1 管 |
陰性質(zhì)控品 | 250μL ×1 管 |
說(shuō)明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融,反復凍融次數不超過(guò) 5 次。有效期 12 個(gè)月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】稱(chēng)取 200g 樣品。【保存和運輸】
上述標本短期內可保存于-20℃,長(cháng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò) 6 個(gè)月,標本運送應采用 0℃。
轉基因大豆MON87705品系試劑盒(熒光-PCR法)使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區)
1.1 樣本前處理
固體樣本:用粉碎機或冷凍研磨儀將樣品研磨至細粉狀。
對于固體標本,DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法:
1) 每個(gè)樣品取 2 個(gè)平行管。稱(chēng)取 200mg 粉碎的樣品,加入 1mL 預冷至 4℃的抽提液,劇烈搖動(dòng)混勻后,在冰上靜止 5min,4℃條件下 10000g 離心 15min,棄上清液;
2) 加入 600μL 預熱至 65℃的裂解液,充分重懸沉淀,在 65℃恒溫保持 40min, 期間顛倒混勻 5 次;
3) 室溫條件下10000g 離心10min,取上清液轉移至新離心管中,加入5μLRNAseA, 37℃恒溫 30min,分別用等體積苯酚:異戊醇溶液:異戊醇溶液各抽提一次;
4) 室溫條件下,10000g 離心 10min,取上清液至新離心管,加入三分之二體積的異丙醇,十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液(pH=6.5),-20℃放置 2-3h;
5) 在 4℃條件下,10000g 離心 15min,棄上清液,用 70%乙醇洗滌沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;
6) 加入 50μL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA 提取試劑盒。
油脂樣本請直接選用市售油脂 DNA 提取試劑盒,按說(shuō)明操作。
根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽(yáng)性對照;樣品每滿(mǎn) 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:
試劑 | MON87705 反應液 | 酶液 |
用量 | 20μL | 1μL |
將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;
1.1 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25μL;熒光通道選擇: 檢測通道
(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)選擇 NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。
1.2 推薦循環(huán)參數設置:
步驟 | 循環(huán)數 | 溫度 | 時(shí)間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動(dòng)分析的結果分析,當曲線(xiàn)出現整體傾斜時(shí),根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線(xiàn)至高于陰性對照),重新分析結果。
結果判斷
陽(yáng)性:檢測通道 Ct 值≤35,且曲線(xiàn)有明顯的指數增長(cháng)曲線(xiàn);
可疑:檢測通道 35<Ct 值≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤ 38,且曲線(xiàn)有明顯的增長(cháng)曲線(xiàn),判定為陽(yáng)性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結果 Ct 值>38 或無(wú) Ct 值。
陰性質(zhì)控品:Ct>38 或無(wú) Ct 值顯示;
陽(yáng)性質(zhì)控品:擴增曲線(xiàn)有明顯指數生長(cháng)期,且 Ct 值≤32; 以上條件應同時(shí)滿(mǎn)足,否則實(shí)驗視為無(wú)效。
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